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一、 产品描述
• 英文全名：AAV9 Titration ELISA
• 中文全名：腺相关病毒9型滴度定量检测试剂盒
• 国际货号：PRAAV9
• 品牌归属：德国 Progen Biotechnik GmbH
• 产品规格：96次反应/盒（含标准品及配套试剂）
• 核心用途：用于精准测定腺相关病毒9型（AAV9）的感染性滴度或物理滴度。
本产品由德国Progen公司进口，专为科研及生物制药领域设计，能够在无需昂贵仪器和复杂操作的前提下，为AAV9载体提供高效、稳定的定量分析解决方案。
二、 产品核心特点
1. 高特异性：采用抗AAV9衣壳蛋白的单克隆抗体，有效避免与其他AAV血清型（如AAV1-AAV8、AAV-DJ等）发生交叉反应，确保检测背景极低。
2. 操作便捷：预包被的微孔板与即用型试剂大大缩短了实验准备时间，整个流程可在数小时内完成。
3. 宽线性范围：标准曲线覆盖至少3个数量级，能够准确定量高浓度或低浓度的病毒样本。
4. 优秀的重现性：板内与板间变异系数（CV%）均严格控制在10%以内，保障每一次实验数据的可靠性。
5. 高灵敏度：低检测限可达 10^7 病毒颗粒（vp）/mL级别，满足大多数体内外基因递送实验的滴度测定需求。
三、 储存条件与试剂稳定性
• 未开封试剂盒储存：请置于 2-8°C 避光保存，有效期详见外包装标签（通常为12个月）。
• 开封后保存建议：
• 捕获抗体预包被微孔板：密封放回 2-8°C，避免板条受潮，建议在 4 周内使用完毕。
• 酶结合物（HRP标记）：切勿冷冻，短期（1-2周）存放于 2-8°C，长期建议根据单次用量分装后置于 -20°C 冻存。
• 检测缓冲液与洗液：室温密闭保存，若结晶析出，使用前预热至 37°C 并充分混匀。
• 工作液稳定性：配制后的底物液（TMB）需在 30 分钟内避光使用；终止液性质稳定，但需注意其强酸性。
四、 工作原理（双抗体夹心ELISA法）
本试剂盒基于经典的双抗体夹心酶联免疫吸附测定（Sandwich ELISA）原理，专门用于特异性识别并结合完整的AAV9病毒颗粒。
1. 固相捕获：微孔板中预包被了高亲和力的抗AAV9特异性单克隆抗体。当加入待测样本或标准品时，样本中的AAV9病毒颗粒会被这些抗体特异性捕获并固定在孔板上。
2. 孵育结合：在适宜的温度下孵育一定时间，使抗原-抗体结合达到平衡，形成“固相抗体-AAV9抗原"复合物。
3. 酶标二抗结合：洗去未结合的物质后，加入带有辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体。该二抗会特异性地结合到已被捕获的AAV9衣壳蛋白的另一位点，形成“固相抗体-AAV9-HRP标记二抗"的免疫复合物。
4. 信号放大与检测：再次洗涤去除游离的酶标二抗后，加入显色底物（通常为TMB）。HRP催化无色底物氧化生成蓝色物质，加入终止液后反应液变为黄色。
5. 定量分析：使用酶标仪在 450 nm 波长处测定各孔的吸光度值（OD值）。吸光度与样本中AAV9的浓度成正比。通过将样本的OD值代入标准曲线，即可精确计算出样本中AAV9的绝对滴度。
五、 解决的核心实验痛点
在基因治疗与基础生命科学研究中，腺相关病毒（AAV）是常用的基因递送载体之一。然而，科研人员在使用AAV9进行实验时常常面临以下难题：
1. 传统滴度测定方法耗时长：如细胞转染后通过荧光斑点数（IU/mL）测定感染性滴度，通常需要 48-72 小时才能出结果，严重拖慢实验进度。
2. qPCR法受杂质干扰大：基于DNA提取的qPCR法不仅操作繁琐，且极易受到样本中残留的质粒DNA、游离基因组DNA污染，导致滴度被严重高估。
3. 昂贵设备依赖性强：如透射电子显微镜（TEM）或分析型超速离心机（AUC）虽然能测衣壳滴度，但设备普及率低且维护成本高。
4. 不同血清型交叉反应导致数据失真：广谱型检测试剂在面对特定血清型时灵敏度不足。
本产品的解决方案：
本ELISA试剂盒弥补了上述缺陷。它能在 4-5 小时内提供基于衣壳蛋白的准确定量，不受样本中外源DNA干扰，无需大型仪器设备，仅需一台常规酶标仪即可获得高度可重复的滴度数据，极大提升了AAV9载体的质控效率和下游实验（如动物体内注射、细胞感染）的剂量可控性。
六、 详细使用方法与操作流程
实验前准备：
• 将所有试剂盒组分及待测样本恢复至室温（18-25°C），约需 30 分钟。
• 准备足量去离子水或超纯水用于配制洗涤液。
• 根据样本预估浓度，准备合适的稀释缓冲液（推荐使用含1% BSA的PBS）。
标准品稀释：
• 试剂盒提供已知浓度的AAV9标准品。取适量标准品，按倍比稀释法（如1:2或1:5）连续稀释6个点，制备标准曲线。低浓度点作为空白对照。
样本预处理与稀释：
• 对于细胞上清液，可直接取样或经低速离心去除细胞碎片后取样。
• 对于浓缩的病毒液，需先进行适度稀释（如 1:100 或 1:1000），使其预期浓度落在标准曲线的线性范围内。建议每个样本做2-3个重复孔。
操作步骤：
1. 加样与孵育：向微孔板中加入 100 µL 不同浓度的标准品或稀释后的待测样本。封板膜密封，室温下在摇床上轻柔振荡孵育 2 小时。
2. 洗涤：弃去孔内液体，每孔加入 300 µL 洗涤缓冲液，静置 30 秒后弃去。重复此步骤 3-5 次。最后在吸水纸上拍干微孔板。
3. 加酶结合物：每孔加入 100 µL 稀释好的HRP标记检测抗体。封板后室温避光孵育 1 小时。
4. 再次洗涤：重复步骤2的洗涤过程，去除未结合的酶标抗体。
5. 显色：每孔加入 100 µL TMB底物溶液，室温避光静置 15-20 分钟。此时可观察到阳性孔逐渐显现蓝色。
6. 终止反应：每孔加入 50 µL 终止液（通常为1M H₂SO₄），此时溶液颜色由蓝转为黄色。
7. 读数计算：在 15 分钟内，使用酶标仪测定 450 nm 处的吸光度值（OD₄₅₀）。以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（通常采用四参数逻辑回归拟合）。将样本的OD值带入方程，计算出样本的实际浓度，再乘以稀释倍数即为原始样本中的AAV9滴度。
七、 常见问题分析与解决方案
• 问题1：标准曲线线性不佳，R²值低于0.99
• 原因分析：标准品降解或稀释操作误差累积；加样时产生气泡；孵育温度不均匀。
• 解决方案：确保标准品分装保存，避免反复冻融；使用高精度移液器并定期校准；加样时枪头贴壁缓慢打出液体，避免气泡；确保孵育环境（如室温）恒定。
• 问题2：背景值过高（空白孔OD值偏高）
• 原因分析：洗涤不够；底物污染；封闭效果不足。
• 解决方案：增加洗涤次数至5次，并确保每次洗涤后在吸水纸上充分拍干；检查洗液是否新鲜配制；若样本基质复杂，可在加标准品前增加1小时的封闭步骤（如使用5%脱脂奶粉或1% BSA）。
• 问题3：样本复孔间变异系数（CV%）过大
• 原因分析：样本未充分混匀；加样体积不准；微孔板边缘效应。
• 解决方案：加样前充分涡旋并离心样本；避免在微孔板最外围一圈加样（可用无菌水填充边缘孔）；确保酶标仪滤光片干净无划痕。
• 问题4：测得的滴度远低于预期
• 原因分析：样本发生聚集；保存不当导致病毒失活降解；稀释倍数计算错误。
• 解决方案：样本使用前进行短暂超声处理或加入少量非离子型去垢剂（如Triton X-100至终浓度0.1%）打散聚集体；避免反复冻融；重新精确测定稀释因子。
关键词：腺相关病毒滴度测定、AAV9 ELISA试剂盒、病毒载体定量检测、Progen AAV9滴定、AAV9空壳率检测、快速AAV滴度测定、无血清AAV9滴度、AAV9物理滴度测定、基因治疗载体质控、AAV9感染性滴度、双抗体夹心ELISA、高特异性AAV9检测、AAV9定量试剂盒、低成本AAV滴度、免洗AAV检测试剂盒、AAV9衣壳蛋白定量、生物制药AAV滴度、AAV9标准品、AAV9 HRP检测抗体、高灵敏度病毒滴度。
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（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）
🔖Progen热卖产品
货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
PRAAV8 | AAV8 Titration ELISA | 96 tests | Progen |
PRAAV9 | AAV9 Titration ELISA | 96 tests | Progen |
690014S | anti-DNA, AC-30-10, mouse mab | 0.2 mL (100 ug/mL) | Progen |
PRAAV2R | AAV2 Titration ELISA 2.0R | 96T | Progen |
PRHYPE-XS | Hyperphage M13 K07ΔpIII | 2ml | Progen |
61014 | anti-DNA mouse monoclonal, AC-30-10, lyophilized, purified (reactivity to all species) Dot Blots , ICC/IF , IHC | 100ug | Progen |
610160 | anti-AAV8 (intact particle) mouse monoclonal, ADK8, lyophilized, purified (reactivity to AAV8) Dot Blots , ELISA , ICC/IF , IHC , IP , Neutralization Assay | 50ug | Progen |
PRATV | AAV2 Titration ELISA | 96T | Progen |
690162 | anti-AAV9, ADK9, mouse mab, liquid | 1 mL (50 ug/mL) | Progen |
610298 | anti-AAV2, A20, mouse recombinant ab | 50ug | Progen |
61084-250ul | anti-AAV VP1/VP2/VP3 (rabbit polyclonal) | 250ul | Progen |
610178 | anti-AAV9, ADK9-1R, mouse recombinant ab | 50ug | Progen |
PRAAV5 | AAV5 Titration ELISA | 96T | Progen |
61055 | aanti-AAV2 (intact particle) mouse monoclonal, A20, lyophilized, purified | 50ug | Progen |
PRAAV6 | AAV6 Titration ELISA | 96T | Progen |
690058S | anti-AAV VP1/VP2/VP3 mouse monoclonal, B1 sample size | 200ul(50ug/ml) | Progen |
PRHYPE | Hyperphage M13 K07ΔpIII | 5 x 2 mL | Progen |
66V020 | AAV2 empty capsids | 100ul | Progen |
66V080 | AAV8 empty capsids | 100ul | Progen |
65158 | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab | 5mL | Progen |
610160S | anti-AAV8, ADK8, mouse mab, sample 10 μg | 10ug | Progen |
GP-N2 | anti-Nephrin, guinea pig pab | 100uL | Progen |
615162 | anti-AAV9 Biotin, ADK9, mouse mab | 750uL | Progen |
PRAAV9XP | AAV9 Xpress ELISA | 96T | Progen |
PRAAV8XP | AAV8 Xpress ELISA | 96T | Progen |
610137 | anti-AAV5, rabbit pab | 250uL | Progen |
610149 | anti-AAV-5, ADK5b, mouse mab | 50ug | Progen |
690298 | anti-AAV2, mouse recombinant ab, A20R | 1ml(50ug/ml) | Progen |
61069 | anti-AAV Replicase, 303.9, mouse mab | 50ug | Progen |
615160 | anti-AAV8 Biotin, ADK8, mouse mab | 750uL | Progen |
GP29-100uL | anti-Perilipin N-terminus, guinea pig pab | 100uL | Progen |
66V090 | AAV9 empty capsids | 100ul | Progen |
610148 | anti-AAV-5, ADK5a, mouse mab | 50ug | Progen |
610159 | anti-AAV6, ADK6, mouse mab | 50ug | Progen |
PRAAV2XP | AAV2 Xpress ELISA | 96T | Progen |
690162S | anti-AAV9, ADK9, Mouse mAk, liquid, Sample | 200uL(50ug/mL) | Progen |
PRAAV1 | AAV1 Titration ELISA | 96T | Progen |
690094S | anti-Synaptopodin, G1D4, mouse mab | 0.2ml(50ug/ml) | Progen |
690058 | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, liquid | 1 ml (50 ug/ml) | Progen |
PR3005 | Phagemid pSEX81 | 5ug | Progen |
66V060 | AAV6 empty capsids | 100ul | Progen |
16045 | anti-HDC, rabbit pab | 50uL | Progen |
72008 | AAV8 VP1 + VP2 + VP3, recombinant proteins, set | 10ug | Progen |
PRAAV2-C | AAV2 ELISA Control | 1 vial | Progen |
66V050 | AAV5 empty capsids | 100ul | Progen |
gp40-100ul | anti-Perilipin 2 (N-terminus aa 1-29) guinea pig polyclonal serum | 100ul | Progen |
66V010 | AAV1 empty capsids | 100ul | Progen |
PRAAV9-C | AAV9 ELISA Control | 1 vial | Progen |
BK610149 | anti-AAV-5, ADK5b, mouse mab | 1mg | Progen |
690383 | anti-pan AAV, 1C4M, mouse chimeric ab | 1ml(50ug/ml) | Progen |
BK61055 | anti-AAV-2, A20, mouse mab | 1mg | Progen |
61058 | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab | 50ug | Progen |
61058-488 | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, AFDyeT | 50 ug (100 ul) | Progen |
61058S | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, sample | 10ug | Progen |
615298 | anti-AAV2 Biotin, A20R, mouse mab | 750uL | Progen |
690014 | anti-DNA mouse monoclonal, AC-30-10, liquid, purified | 1ml(100ug/ml) | Progen |
GP31 | anti-Perilipin 5 C-terminus, guinea pig pab | 100uL | Progen |
65155 | anti-AAV-2, A20, mouse mab | 5mL | Progen |
GP41 | anti-Adipophilin C-terminus, guinea pig pab | 100uL | Progen |
651162 | anti-AAV9, ADK9, mouse mab | 5mL | Progen |
70011 | anti-Perilipin 2,3,5 sample set | 600 ul | Progen |
692378S | anti-AAV9, human chimeric, ADK9-h1, sample | 200 ul (50 ug/ml) | Progen |
692373-1ml | anti-pan AAV (intact particle) human recombinant, 1C4H | 1 ml (50 ug/ml) | Progen |
90002 | anti-mouse IgG goat polyclonal, HRP conjugate 100 μg | 100ug | Progen |
90002-100ug | anti-mouse IgG goat polyclonal, HRP conjugate | 100ug | Progen |
AAV-SAMP | antibody buffer 20ml buffer formulation: PBS, 0,5 M NaCl, 0,25 M L-Arginine, pH 7.4 | 1pc | Progen |
690298S | anti-AAV2, mouse recombinant ab, A20R, sample | 200ul(50ug/ml) | Progen |
690160 | anti-AAV8 (intact particle) mouse monoclonal, ADK8 | 1 ml (50 ug/ml) | Progen |
690159S | anti-AAV6, mouse monoclonal, ADK6, sample | 200 ul (50 ug/ml) | Progen |
690150 | anti-AAV1 (intact particle) mouse monoclonal, ADK1a | 1 ml (50 ug/ml) | Progen |
690148 | anti-AAV-5, ADK5a, mouse mab | 1ml(50ug/ml) | Progen |
690055S | anti-AAV2, A20, mouse mab | 200ul(50ug/ml) | Progen |
690055 | anti-AAV2, A20, mouse mab | 1ml(50ug/ml) | Progen |
690038 | anti-Keratin K8, Ks8.7, mouse mab | 1mL(50ug/mL) | Progen |
GP-SH3 | anti-Calicin, guinea pig pab | 100uL | Progen |
690028 | anti-Keratin K18, Ks18.04, mouse mab | 1mL(50ug/mL) | Progen |
GP34-100uL | anti-Perilipin 4 C-terminus, guinea pig pab | 100uL | Progen |
66V030 | AAV3 empty capsids | 100ul | Progen |
640825 | AAV2 VP3, recombinant protein | 10ug(100ug/ml) | Progen |
PRAAV10 | AAVrh10 Titration ELISA | 96T | Progen |
61058-647 | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, AFDyeT | 50ug (100 ul) | Progen |
61056 | anti-AAV VP1, A1, mouse mab | 50ug | Progen |
610298S | anti-AAV2, A20R, mouse recombinant ab, sample | 10ug | Progen |
PR6103 | LNP Protein Delivery Kit | 1 kit | Progen |
PRAAV3-C | AAV3 ELISA Control | 1vial | Progen |
PRAAV3R | AAV3 Titration ELISA 2.0R | 96T | Progen |
610150 | anti-AAV1, ADK1a, mouse mab | 50ug | Progen |
610149S | anti-AAV5, ADK5b, mouse mab, sample | 10ug | Progen |
61094 | anti-Synaptopodin, G1D4, mouse mab | 50ug | Progen |
PR5223 | Dip'n'Check AAV2 and AAV3 | 25Ttripes | Progen |
PR5208 | Dip'n'Check AAV8 | 25Ttripes | Progen |
615148 | anti-AAV5 Biotin, ADK5a, mouse mab | 750uL | Progen |
61555 | anti-AAV-2 Biotin, A20, mouse mab | 750uL | Progen |
640823 | AAV2 VP1, recombinant protein | 10ug(100ug/ml) | Progen |
640824 | AAV2 VP2, recombinant protein | 10ug(100ug/ml) | Progen |
651160 | anti-AAV8, ADK8, mouse mab | 5mL | Progen |
PRAAV6XP | AAV6 Xpress ELISA | 96T | Progen |
PRAAV8-C | AAV8 ELISA Control | 1vial | Progen |
GP62-C | anti-p62 Protein C-terminus, guinea pig pab | 100uL | Progen |
GP53 | anti-Vimentin guinea pig polyclonal, serum (reactivity to bovine , human , mouse) ICC/IF , IHC , WB | 100uL | Progen |
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